單克隆抗體的詳細制備方法
查看詳情自Kohler和Milstein建立了淋巴細胞雜交瘤技術(shù)后，他們將只針對一種抗原決定簇產(chǎn)生抗體B淋巴細胞和能無限增殖的腫瘤細胞融合雜交，產(chǎn)生既能分泌抗體，又能無限增殖的雜交融合細胞，它所產(chǎn)生的抗體是針對同一抗原決定簇的高度同質(zhì)的抗體，即單克隆抗體（monoclonal antibody），簡稱單抗。與多抗相比，單抗純度高，專一性強、重復性好、且能持續(xù)地無限量供應(yīng)。單抗技術(shù)的問世，不僅帶來了免疫學領(lǐng)域里的一次革命，而且它在生物醫(yī)學科學的各個領(lǐng)域獲得極廣泛的應(yīng)用，促進了眾多學科的發(fā)展。單克隆抗體制備的基本過程如下：（1）用抗原......
降鈣素原，常規(guī)感染檢查的侯選者?
查看詳情隨著抗生素在臨床中使用地越來越廣泛，加上新的病毒如SARS，H7N9等的發(fā)現(xiàn)，新的問題也隨之而來。由于部分患者臨床病情隱匿或不典型，并且受到醫(yī)生個體臨床思維及經(jīng)驗局限的影響，癥狀相似疾病的確診往往也變得困難起來。特別是對于細菌性感染和非細菌性感染，其治療手段完全不同，一旦出現(xiàn)誤診，有可能會造成錯過最佳診療時間，導致病情惡化等嚴重后果。因此，我們在臨床上應(yīng)該如何判斷患者到底是細菌性感染還是非細菌性感染呢？實驗人員在研究中發(fā)現(xiàn)，PCT（降鈣素原，procalcitonin）是一種非常特殊的蛋白質(zhì)，其結(jié)構(gòu)如圖1所示當嚴......
實驗操作指南-免疫組織化學常見問題和解決方法
查看詳情免疫組織化學技術(shù)又稱免疫細胞化學技術(shù)，是指用標記的特異性抗體在組織細胞原位通過抗原抗體反應(yīng)和組織化學的呈色反應(yīng)，對相應(yīng)抗原進行定性、定位、定量測定的一項免疫檢測方法。它把免疫反應(yīng)的特異性、組織化學的可見性和分子生物技術(shù)的敏感性等巧妙結(jié)合，借助顯微鏡的顯像和放大作用，在細胞、亞細胞水平檢測各種抗原物質(zhì)（如蛋白質(zhì)、多肽、酶、激素、病原體以及受體等），是單一的靜止的形態(tài)學描述，上升到結(jié)構(gòu)、功能和代謝為一體的動態(tài)觀察，為疾病的診斷、鑒別診斷和發(fā)病機制的研究提供了強有力的手段。然而，要想得到一張高質(zhì)......
多克隆抗體的詳細制備方法
查看詳情多克隆抗體（polyclonal antibody, pAb）是指用含有多個抗原決定簇的抗原免疫動物后刺激機體多個B細胞克隆產(chǎn)生針對多種抗原表位的不同抗體，得到的免疫血清含有多種抗體。多克隆抗體可應(yīng)用于WB、IHC、Elisa、IP等實驗中，是生物醫(yī)學研究領(lǐng)域不可或缺的研究伙伴。下面我們會來介紹一下多克隆抗體的制備過程。1.免疫原的制備普通的大分子蛋白，通過分子克隆構(gòu)建載體并在大腸桿菌中進行誘導表達獲得重組蛋白，純化鑒定后可直接作為免疫原。小分子蛋白或化合物等分子量小，需要偶聯(lián)載體對該分子進行改造才能使其成為具有免疫原性的抗原......
競爭抑制ELISA檢測原理
查看詳情競爭抑制ELISA法是指將特異性抗體吸附于固相載體，隨后加入待測抗原（標準品和樣本）和一定量的生物素標記的抗原（檢測液A），使二者競爭與固 相抗體結(jié)合，溫育后經(jīng)洗滌去掉未結(jié)合物，然后加入HRP標記的親和素，經(jīng)過溫育和徹底洗滌后加入底物 TMB 顯色。TMB 在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。待測標本濃度越高，標記抗原和抗體的結(jié)合就越受到抑制，顯色愈淺。顯色的深淺與酶量呈正相關(guān)，而與樣品中待測物質(zhì)含量呈負相關(guān)。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度（O.D.值），計算樣品濃度。由于生物大分......
大腸桿菌重組蛋白純化方法
查看詳情分子克隆構(gòu)建載體的最終目的是能夠?qū)⒛康牡鞍妆磉_出來，常見的表達系 統(tǒng)有大腸桿菌表達系統(tǒng)，酵母表達系統(tǒng)，昆蟲細胞表達系統(tǒng)，植物表達系統(tǒng)以 及哺乳動物細胞表達系統(tǒng)。大腸桿菌表達系統(tǒng)具有遺傳背景清楚、操作簡單、 產(chǎn)量高、價格低等優(yōu)點，是最常用的蛋白表達系統(tǒng)之一。重組蛋白的分離純化 是蛋白，抗體，Elisa 試劑盒研發(fā)與制備的基礎(chǔ)。常見的純化方法有離子交換層 析，親和層析，疏水作用層析，排阻層析，電泳等，但純化工作不僅要保證純 度，重復性，還要保證穩(wěn)定性并控制成本。以下將以 E.coli 表達的重組蛋白為例， 給大家......
雙抗夾心法ELISA檢測原理
查看詳情雙抗夾心 ELISA 法是指將特異性針對待測抗原的抗體包被于 96 孔微孔板 中，制成固相載體，向微孔中分別加入標準品或標本，其中待測抗原與連接于 固相載體上的抗體結(jié)合，然后加入生物素化的針對待測抗原的抗體，形成夾心， 將未結(jié)合的生物素化抗體洗凈后，加入 HRP 標記的親和素，再次徹底洗滌后加 入 TMB 底物顯色。TMB 在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下 轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的待測抗原呈正相關(guān)。用酶標儀在 450nm 波長下測定吸光度(O.D.值)，用于樣本中待測抗原濃度測算。原理圖如下：
ELISA法檢測細胞凋亡的優(yōu)勢
查看詳情細胞凋亡，亦稱細胞程序性死亡，是細胞在一系列內(nèi)源性基因的調(diào)控下發(fā) 生的自然或生理性死亡的過程。細胞凋亡與壞死是兩種完全不同的細胞死亡形 式，根據(jù)死亡細胞在形態(tài)學、生物化學和分子生物學上的差別，可以將二者區(qū) 別開來。傳統(tǒng)的檢測細胞凋亡的方法有很多種，主要包括：1. 細胞凋亡的形態(tài)學檢測，包括直接用光學顯微鏡、倒置顯微鏡、熒光顯 微鏡、共聚焦激光掃描顯微鏡或透射電子顯微鏡等觀察是否有凋亡小體；2. 磷脂酰絲氨酸外翻分析（AnnexinV 法），包括用標記了的 Annexin-V 作 為熒光探針，利用流式細胞儀或熒光顯微鏡來......