酸性 α- 葡萄糖苷酶-龐貝病的診斷金標(biāo)準(zhǔn)
查看詳情酸性α- 葡萄糖苷酶 (Glucosidase Alpha, Acid, GaA)，為淀粉水解酶類的一種。它能催化多糖水解，產(chǎn)生α- D-葡萄糖。同時它也具有轉(zhuǎn)糖苷作用，可將低聚糖中的α-1，4-糖苷鍵轉(zhuǎn)化成α-1，6-糖苷鍵或其他形式的鏈接，從而得到非發(fā)酵性的低聚異麥芽糖或糖酯、糖肽等。當(dāng)位于第17號染色體上編碼酸性α-葡糖苷酶的基因突變，造成體內(nèi)酸性α- 葡萄糖苷酶缺乏，糖原無法正常代謝，導(dǎo)致體內(nèi)糖原在骨骼肌、心肌和平滑肌等肌肉組織內(nèi)大量集聚，導(dǎo)致嚴(yán)重的神經(jīng)肌肉病變。這種溶酶體貯積癥，被稱為龐貝病，也稱為酸性α -葡糖苷酶缺乏癥或II型糖原貯積......
補體C3在血清血漿中的檢測及應(yīng)用
查看詳情補體（Complement）主要分布在人和動物的體液和細(xì)胞表面，活化后有生物活性，并可介導(dǎo)免疫和炎癥反應(yīng)的一組蛋白質(zhì)，又稱為補體系統(tǒng)。補體系統(tǒng)由近40種成分組成，大部分都是糖蛋白。補體的固有成分有13類，調(diào)節(jié)蛋白有10類；補體受體10多種。補體不耐熱，當(dāng)溫度達(dá)到56度，時間達(dá)到30分鐘時大部分補體會失活。補體不易保存，冷凍干燥，保存時間相對長一些。補體第三組分（Complement Component 3，C3）是補體的核心成分，分子量為195000，由19號染色體C3基因編碼。C3是血液中含量最大的補體成分，主要由巨噬細(xì)胞和肝臟合成。C3在補體經(jīng)......
MAPK級聯(lián)激活信號通路
查看詳情絲裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinase，MAPK）是一組能被不同的細(xì)胞外刺激，如細(xì)胞因子、神經(jīng)遞質(zhì)、激素、細(xì)胞應(yīng)激及細(xì)胞黏附等激活的絲氨酸-蘇氨酸蛋白激酶。MAPK信號通路是利用逐級磷酸化過程將信號放大傳至細(xì)胞核內(nèi)，調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄因子的活性，調(diào)控相應(yīng)基因的表達(dá)，進(jìn)而引起細(xì)胞反應(yīng)的一類重要信號系統(tǒng)。MAPK級聯(lián)激活是多種信號通路的中心，參與到細(xì)胞的分裂、分化、凋亡等多種生命過程，且在一些骨關(guān)節(jié)組織炎癥，癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移等病癥中發(fā)揮關(guān)鍵性作用。MAPK信號轉(zhuǎn)導(dǎo)是以3 級激酶級聯(lián)激活的方式進(jìn)行的，如圖所示，首先M......
各種組蛋白的體外檢測及提取技術(shù)
查看詳情組蛋白（histones）是真核細(xì)胞核中染色質(zhì)中的強堿性蛋白質(zhì)，是真核生物染色體的基本結(jié)構(gòu)蛋白。組蛋白將DNA進(jìn)行壓縮并與DNA一起形成核小體，如果沒有組蛋白，染色體DNA解開，形成散亂的很長的DNA鏈。組蛋白的研究具有非常重要的意義。體內(nèi)組蛋白的異常會導(dǎo)致許多疾病，如慢性腎病等。同時有關(guān)組蛋白的修飾與機體免疫調(diào)節(jié)，自身免疫病，腫瘤，神經(jīng)系統(tǒng)疾病，以及內(nèi)分泌疾病都非常相關(guān)。組蛋白有六種類型：H1、H2A、H2B、H3、H4及古細(xì)菌組蛋白，它們富含帶正電荷的堿性氨基酸，而DNA中主要帶負(fù)電荷，二者相互作用，使DNA纏繞在組蛋白上......
總蛋白定量方法簡介及優(yōu)缺點
查看詳情蛋白質(zhì)定量是生物學(xué)實驗不可缺少的部分，該技術(shù)被廣泛的用于多個領(lǐng)域和行業(yè)，包括生物學(xué)科、食品檢驗、臨床檢驗、疾病診斷等。在實際應(yīng)用操作過程中，對樣本中蛋白質(zhì)進(jìn)行準(zhǔn)確可靠的定量分析，是常用且重要的工作。盡管目前有多種總蛋白定量的方法，但是由于蛋白質(zhì)種類繁多，結(jié)構(gòu)復(fù)雜，分子量差異大，且功能各異，暫無理想而通用的蛋白質(zhì)定量分析方法?，F(xiàn)介紹目前常用的定量方法以及優(yōu)選點，實驗工作者可根據(jù)實驗需要，選取合適的定量方法。蛋白定量法可分為以下兩大類，化學(xué)檢測法，包括福林-酚法（Lowry）、二喹啉甲酸法（BCA）、......
一種高效無縫基因拼接技術(shù)
查看詳情隨著PCR技術(shù)的出現(xiàn)，人們逐漸的打開通往研究生命本質(zhì)的大門，這也使PCR技術(shù)成為了上個世紀(jì)最為偉大的技術(shù)之一。通過PCR技術(shù)能在體外迅速、大量、靈敏地擴增出目的基因片段，但是需要靈活的改造基因，只有目的基因片段是遠(yuǎn)遠(yuǎn)不夠的，還需要一種高效的基因加工手段——基因拼接技術(shù)。在實驗操作過程中，無論出于基因改造、載體改造以及將來會出現(xiàn)的物種改造等多種涉及DNA操作的實驗，都不可避免會使用到基因拼接技術(shù)。 1989年Horton等人提出了SOE法（Gene splicing by over lap extension）即通過復(fù)制時DNA鏈的交錯延伸來實現(xiàn)基因拼接；......
活化的caspase 3的檢測
查看詳情Caspase (Cysteine aspartic acid specific protease，半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶) 是近年發(fā)現(xiàn)的一組存在于細(xì)胞質(zhì)中，活化位點均含有半胱氨酸，且特異性斷開天冬氨酸殘基后肽鍵的蛋白酶。Caspase在細(xì)胞程序性死亡（又稱凋亡，apoptosis）中起重要作用。迄今為止，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)的人的caspase家族成員已達(dá)12種。Caspase 3 是caspase家族的一個重要成員，其在細(xì)胞凋亡過程中作為最主要的終末剪切酶行使作用。該蛋白由pro-caspase 3 酶原經(jīng)過進(jìn)一步的加工而形成，pro-caspase 3 是一個含有277個氨基酸殘基的前體蛋白，對其結(jié)構(gòu)進(jìn)行分析，可以分......
IN-FUSION一種高效無酶連接技術(shù)
查看詳情在傳統(tǒng)的分子克隆中，我們經(jīng)常通過PCR技術(shù)擴增得到目的基因后，先構(gòu)建T-A克隆載體，將基因在大腸桿菌中進(jìn)行擴增，然后酶切陽性T-A載體和目標(biāo)載體，最后進(jìn)行目的基因和目的載體的連接。這個過程大概需要1-2周來完成，而且具有很大的局限性，主要表現(xiàn)在：1、載體多克隆位點和基因內(nèi)部酶切位點的局限性；2、基因克隆過程中需要添加酶切位點，可能會帶入非特異性擴增；3、對于長片段與目標(biāo)載體的連接效果差；4、無法實現(xiàn)大規(guī)模載體的構(gòu)建。IN-FUSION技術(shù)主要來源于INFUSION酶的發(fā)現(xiàn)，（如圖）INFUSION酶能夠識別線性化的DNA片段5’......