云克隆產(chǎn)品常見問題——抗體篇
Q1. 抗體如何保存?
A1. 參見說明書[ STORAGE AND STABILITY ],不同的抗體產(chǎn)品保存方式也會存在差別。
1)大多數(shù)抗體產(chǎn)品保存方法如下圖,分裝,-20°C凍存,有效期為24個月。
2)熒光素標(biāo)記抗體保存方法以LAC101Hu41(PE-Linked Polyclonal Antibody to Integrin Beta 8 (ITGb8))為例,需4°C避光保存,有效期為12個月。
Q2. 抗體的濃度是多少?
A2. 參見說明書[ PROPERTIES ]中的“Concentration”。
Q3. 多克隆抗體所識別的抗原表位是哪一段序列?
A3. 多克隆抗體是由多個B細(xì)胞克隆產(chǎn)生的抗體混合物,能夠識別同一抗原(免疫原)的多個不同表位(即抗原決定簇)。以PAB094Mu01(Polyclonal Antibody to Coagulation Factor XIII A1 Polypeptide (F13A1))為例,其免疫原見下圖。
Q4. 單克隆抗體抗原表位是哪一段序列?
A4. 對于單克隆抗體,目前沒有檢測過抗原表位。表位是一個僅包含約8至10個氨基酸的小片段,通常抗原(免疫原)有多個表位。只有當(dāng)免疫原是肽時,表位才會很容易確定。然而,云克隆使用重組蛋白作為免疫原來制備抗體,當(dāng)免疫原是一種含有多個表位的蛋白時,抗體識別表位的鑒定對大多數(shù)生物公司來說是一項(xiàng)艱巨的任務(wù)。所以針對單克隆抗體,我們能確定的是免疫原序列(見說明書),但不能確定所識別的單一表位。
Q5. 云克隆可以提供標(biāo)記抗體嗎?
A5. 云克隆研發(fā)的所有抗體產(chǎn)品,都可以通過偶聯(lián)生產(chǎn)各種標(biāo)記抗體,包括:Biotin、HRP以及約20種熒光素,如FITC、APC、PE、PerCP、Cy系列以及AF系列等。
Q6. 抗體產(chǎn)品是否適用于說明書中未列出的應(yīng)用?
A6. 對于未列出的應(yīng)用,目前暫時未驗(yàn)證。客戶可對應(yīng)用進(jìn)行擴(kuò)展,并分享給我們數(shù)據(jù),我們可以提供獎勵。
Q7. 抗體的緩沖液可以更換嗎?
A7. 抗體的緩沖液是經(jīng)過驗(yàn)證后優(yōu)選的緩沖體系。如果客戶的實(shí)驗(yàn)對于緩沖液有特別要求,抗體的緩沖液可以更換。除了產(chǎn)品頁面上顯示的原始緩沖液外,云克隆還接受定制配方(不含甘油、不含防腐劑等)。請聯(lián)系云克隆銷售團(tuán)隊(duì)/您當(dāng)?shù)氐慕?jīng)銷商,告知您的需求即可獲取解決方案。
Q8. 當(dāng)同一靶標(biāo)物有多種抗體選擇時,哪一種最適合我的應(yīng)用?
A8. 通常,針對一種靶標(biāo)物,云克隆可提供不止一種抗體產(chǎn)品。建議選用您所需的應(yīng)用中表現(xiàn)最佳的抗體,可以參考產(chǎn)品說明書中驗(yàn)證過的實(shí)驗(yàn)結(jié)果圖。如仍需幫助,請聯(lián)系云克隆技術(shù)支持,以助您選擇適合實(shí)驗(yàn)應(yīng)用的最佳抗體。
Q9. WB實(shí)驗(yàn)條帶為什么與文獻(xiàn)/蛋白分子量不一致?
A9. WB實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證的樣本包括重組蛋白和天然樣本。當(dāng)樣本是重組蛋白片段時,分子量與天然蛋白會存在差異,因而條帶大小不同。但是這不影響抗體識別天然樣本,當(dāng)使用天然樣本進(jìn)行WB實(shí)驗(yàn)時,將會獲得與天然蛋白分子量一致的條帶。
以MAA909Hu22(Monoclonal Antibody to Ceruloplasmin (CP))為例。下圖A檢測樣本為重組人Ceruloplasmin蛋白片段 (Asp789~Gly1065 with N-terminal His Tag),其分子量為33KDa,所以WB條帶在33KDa。下圖B檢測樣本為天然樣本(人血清),人Ceruloplasmin蛋白由1065個氨基酸組成,預(yù)測分子量為122KDa,且天然蛋白可能經(jīng)歷表達(dá)后修飾(如糖基化、磷酸化、泛素化等),所以WB條帶出現(xiàn)在140KDa。
Q10. 如何選擇第二抗體?
A10. 選擇第二抗體(二抗)是免疫實(shí)驗(yàn)(如Western Blot、ELISA、IF等)中的關(guān)鍵步驟,正確選擇二抗能顯著提高實(shí)驗(yàn)的特異性和信號強(qiáng)度。
選擇二抗主要考慮以下因素:
1)一抗的種屬來源和類型
如果一抗是來源于兔,則選用抗兔IgG,例如羊抗兔,豚鼠抗兔IgG等。
如果一抗是來源于小鼠,則選用抗小鼠IgG,例如羊抗小鼠,兔抗小鼠IgG等。
2)根據(jù)實(shí)驗(yàn)選擇二抗標(biāo)記物
二抗的標(biāo)記物包括酶、生物素和熒光素等。標(biāo)記物的選擇取決于實(shí)驗(yàn)的類型。WB 和 IHC,通常選用酶標(biāo)二抗,而IF檢測中常使用熒光素標(biāo)記二抗。
Q11. 云克隆可以提供抗體產(chǎn)品定制服務(wù)嗎?
A11. 云克隆可以為客戶提供抗體產(chǎn)品定制服務(wù),客戶也可以根據(jù)自身的需求靈活地選擇服務(wù)項(xiàng)目或個性化的定制服務(wù)?;诠咀越ǖ耐晟频募夹g(shù)平臺,可提供多克隆抗體制備和單克隆抗體制備定制服務(wù)。
1)多克隆抗體的定制流程:
抗原→免疫動物→抗血清獲取→抗體純化
2)單克隆抗體的定制流程:
抗原→免疫動物→細(xì)胞融合和篩選 →腹水制備/細(xì)胞培養(yǎng)表達(dá)抗體→抗體純化
3)定制服務(wù)特色
① 擁有專業(yè)從事動物飼養(yǎng)和動物實(shí)驗(yàn)的動物公司,動物死亡率<1%。
② 擁有多種實(shí)驗(yàn)動物可供選擇。
③ 自主研發(fā)有高分子完全佐劑和不完全佐劑,其免疫效果是弗氏完全佐劑和弗氏不完全佐劑的2-3倍。
④ 納米乳化技術(shù)。
⑤ Easy-Fusion技術(shù)快速高效制備雜交瘤細(xì)胞。
⑥ 提供Protein A,Protein G,抗原親和純化等多種純化方式。
⑦ 提供抗體標(biāo)記服務(wù),包括HRP、Biotin以及多種熒光素等。
⑧ 提供Western-blot、ICC/IHC、IP、FACS等多種檢測方式。
Q12. 如何從抗體產(chǎn)品說明書中獲取有效信息?
A12. 客戶咨詢的很多問題都能在產(chǎn)品說明書中找到,如抗體的來源、宿主、純化方法、濃度、規(guī)格、物種交叉、免疫原、適用的實(shí)驗(yàn)以及推薦的抗體工作濃度、抗體buffer、抗體保存方法以及抗體驗(yàn)證結(jié)果圖。
如果已有產(chǎn)品不能滿足客戶需求,請聯(lián)系云克隆技術(shù)支持,以確認(rèn)是否可以按客戶需求制備產(chǎn)品。