抗衰新發(fā)現(xiàn)——石膽酸模擬熱量限制助力長(zhǎng)壽


“七分飽,活到老”這句俗語(yǔ)體現(xiàn)了人們對(duì)節(jié)食養(yǎng)生求長(zhǎng)壽的深刻理解。在今天,熱量限制(又稱卡路里限制,calorie restriction,CR)正是這種古老智慧的現(xiàn)代詮釋。CR是指在確保營(yíng)養(yǎng)的前提下減少每日的能量攝入。科學(xué)家們正積極探索CR延壽奧秘,尋求既享受美食又健康長(zhǎng)壽的途徑。

2024年12月18日廈門大學(xué)林圣彩院士團(tuán)隊(duì)在《Nature》雜志上同期發(fā)表了兩篇研究論文“Lithocholic acid phenocopies anti-ageing effects of calorie restriction”和“Lithocholic acid binds TULP3 to activate sirtuins and AMPK to slow down ageing”展示了他們的最新研究成果。他們發(fā)現(xiàn)了一種CR的模擬物——石膽酸(Lithocholic acid,LCA),并深入揭示石膽酸參與延長(zhǎng)壽命分子機(jī)制。

 

 

 

在文章“Lithocholic acid phenocopies anti-ageing effects of calorie restriction”中,林圣彩院士團(tuán)隊(duì)針對(duì)LCA模擬CR的抗衰老效果進(jìn)行研究。研究聚焦于能量代謝調(diào)控核心調(diào)控因子腺苷酸活化蛋白激酶(AMP-activated protein kinase,AMPK),已知AMPK能參與調(diào)節(jié)衰老相關(guān)的信號(hào)通路,影響細(xì)胞過(guò)程,故成為尋找CR模擬物的重要目標(biāo)。

研究人員推測(cè),CR產(chǎn)生的血清代謝物可能具有細(xì)胞和機(jī)體水平的抗衰老作用。他們發(fā)現(xiàn),CR處理4個(gè)月的小鼠血清能激活A(yù)MPK。且56℃熱處理后仍能保持此能力,但透析后激活A(yù)MPK能力失效。這表明CR血清中存在一種熱穩(wěn)定的小分子代謝物,能激活A(yù)MPK。(圖1)

 

圖1. CR處理的小鼠血清可激活細(xì)胞和小鼠體內(nèi)的AMPK

 

研究人員通過(guò)對(duì)血清進(jìn)行代謝組學(xué)分析,在CR血清中鑒定出LCA為特異性代謝物,并證實(shí)LCA在生理濃度下能激活A(yù)MPK。研究人員對(duì)小鼠進(jìn)行了LCA干預(yù)并檢測(cè),確認(rèn)LCA干預(yù)能夠像CR血清一樣有效地介導(dǎo)AMPK激活。(圖2)

 

圖2. LCA是CR血清中的AMPK激活因子

研究人員進(jìn)一步探討LCA對(duì)衰老過(guò)程的影響。他們發(fā)現(xiàn),連續(xù)一個(gè)月給老年小鼠注射LCA可顯著改善肌肉指標(biāo),使小鼠肌肉萎縮程度降低,線粒體功能增強(qiáng),肌肉功能提升。值得注意的是,接受LCA干預(yù)的小鼠并未出現(xiàn)肌肉損失,而肌肉損失在實(shí)施CR的小鼠中是一個(gè)常見現(xiàn)象。同時(shí),研究還發(fā)現(xiàn),敲除AMPKα基因會(huì)削弱LCA對(duì)肌肉功能的改善作用。這些發(fā)現(xiàn)說(shuō)明LCA能夠通過(guò)改善肌肉功能來(lái)抵抗衰老過(guò)程,且其抗衰老作用依賴于AMPK的激活。(圖3)

 

圖3. LCA依賴AMPK產(chǎn)生抗衰老作用

已知LCA能夠改善肌肉功能,研究人員繼續(xù)探究LCA是否具有延長(zhǎng)壽命的潛力。他們選擇了線蟲和果蠅作為實(shí)驗(yàn)?zāi)P?,?duì)這兩種生物進(jìn)行LCA干預(yù)。接受LCA處理的線蟲和果蠅平均壽命均顯著長(zhǎng)于對(duì)照組,且多項(xiàng)健康指標(biāo)表明LCA能夠有效提升線蟲和果蠅的健康狀況并延長(zhǎng)其壽命。(圖4) 

 

 

圖4. LCA提高健康水平延長(zhǎng)壽命

以上發(fā)現(xiàn)表明LCA可作為一種CR模擬物,通過(guò)依賴AMPK的途徑發(fā)揮抗衰老作用。那么LCA是通過(guò)什么機(jī)制激活A(yù)MPK實(shí)現(xiàn)抗衰老效果呢?。在“Lithocholic acid binds TULP3 to activate sirtuins and AMPK to slow down ageing”中研究人員詳細(xì)闡述了進(jìn)一步的研究成果。

前期研究可知LCA激活A(yù)MPK并不依賴于提高AMP/ATP或ADP/ATP的比例,也不涉及全身鈣離子水平升高,因此他們推測(cè)LCA可能是通過(guò)溶酶體葡萄糖感知途徑來(lái)激活A(yù)MPK。在LCA處理后,參與溶酶體葡萄糖感知途徑的關(guān)鍵蛋白AXIN和LKB1定位在溶酶體上;v-ATPase活性降低,激活了溶酶體葡萄糖感知途徑;而當(dāng)v-ATPase的V0域C亞基基因被敲除后,AXIN和LKB1無(wú)法與v-ATPase結(jié)合,阻斷了LCA誘導(dǎo)的AMPK激活。分析自由進(jìn)食和CR小鼠的血糖發(fā)現(xiàn),CR小鼠血糖水平顯著降低,而FBP(糖酵解的中間產(chǎn)物)變化不大。這表明LCA激活A(yù)MPK并非通過(guò)降低血糖和FBP水平,而是通過(guò)低糖傳感器醛縮酶-TRPV軸下游的溶酶體途徑來(lái)實(shí)現(xiàn)。(圖5)

 

圖5. LCA激活低糖傳感器醛縮酶-TRPV軸下游的溶酶體AMPK通路

研究人員提出一個(gè)假設(shè):v-ATPase的翻譯后修飾可能是LCA介導(dǎo)AMPK激活的起始步驟。質(zhì)譜分析v-ATPase的21個(gè)亞基顯示乙酰化是主要修飾,共識(shí)別出263個(gè)乙?;馁嚢彼釟埢?。對(duì)這263個(gè)位點(diǎn)突變分析后,他們發(fā)現(xiàn)V1E1亞基上的K52、K99和K191位點(diǎn)的去乙?;cAMPK的激活密切相關(guān)。LCA處理特異性導(dǎo)致V1E1亞基上K99位點(diǎn)的去乙酰化。模擬去乙?;腣1E1突變體能持續(xù)激活A(yù)MPK,而模擬乙?;耐蛔凅w則持續(xù)抑制AMPK的激活。這證實(shí)LCA通過(guò)去乙?;疺1E1抑制v-ATPase活性,進(jìn)而激活溶酶體AMPK信號(hào)通路,實(shí)現(xiàn)AMPK激活。(圖6)

 

圖6. LCA誘導(dǎo)v-ATPase去乙?;せ預(yù)MPK

已知細(xì)胞內(nèi)去乙酰化酶主要包括SIRT家族(Sirtuins,包括SIRT1至SIRT7)和HDAC家族(包括HDAC1至HDAC11)。他們發(fā)現(xiàn)在細(xì)胞中表達(dá)任一Sirtuins成員均能觀察到V1E1亞基去乙?;F(xiàn)象,而表達(dá)HDAC家族蛋白則未能引發(fā)相似變化。當(dāng)單獨(dú)敲除Sirtuins中某一成員時(shí),其他Sirtuins蛋白能夠補(bǔ)償其功能,但當(dāng)七個(gè)Sirtuins蛋白全被敲除時(shí),LCA誘導(dǎo)的V1E1去乙酰化以及AMPK激活均被阻斷。此外他們還檢測(cè)了LCA對(duì)Sirtuins的另一底物組蛋白H3K9位點(diǎn)的去乙?;饔茫Y(jié)果證實(shí)LCA促進(jìn)了該位點(diǎn)的去乙?;_@些發(fā)現(xiàn)顯示LCA通過(guò)增強(qiáng)Sirtuins蛋白活性促進(jìn)V1E1亞基的去乙?;?,進(jìn)而通過(guò)溶酶體途徑激活A(yù)MPK。(圖7)

 

圖7. Sirtuins蛋白促進(jìn)V1E1去乙?;?/p>

研究人員發(fā)現(xiàn)Sirtuins可以被LCA激活,且這一作用不依賴于NAD+水平變化。接著研究人員將SIRT1與不同濃度的LCA共同孵化,發(fā)現(xiàn)LCA并未直接激活或直接結(jié)合SIRT1。但在細(xì)胞裂解物處理之后,加入LCA可提高SIRT1活性。表明LCA是通過(guò)細(xì)胞裂解物中的某種未知蛋白間接激活Sirtuins。

研究人員從細(xì)胞裂解物種下拉SIRT1并對(duì)其進(jìn)行質(zhì)譜分析,共鑒定出1655個(gè)潛在的SIRT1結(jié)合蛋白,其中有157個(gè)蛋白能與SIRT1發(fā)生免疫共沉淀。進(jìn)一步檢測(cè)他們發(fā)現(xiàn)敲低和敲除Tulp3基因后,細(xì)胞對(duì)LCA的處理變得不敏感。這證實(shí)TULP3是LCA誘導(dǎo)激活A(yù)MPK和Sirtuins的必要條件。TULP3與Sirtuins中七個(gè)成員蛋白均可相互作用,這種相互作用與LCA無(wú)關(guān)。結(jié)構(gòu)域映射實(shí)驗(yàn)也揭示TULP3與LCA的特異性結(jié)合,結(jié)合關(guān)鍵區(qū)域?qū)τ赥ULP3結(jié)合LCA并激活SIRT1至關(guān)重要。綜合以上結(jié)果研究人員可知:TULP3是LCA激活SIRT1的關(guān)鍵受體,它通過(guò)結(jié)合LCA并激活SIRT1介導(dǎo)LCA的生物學(xué)效應(yīng)。(圖8)

 

圖8. TULP3是LCA結(jié)合蛋白可激活Sirtuins

隨后研究人員研究TULP3-sirtuin-v-ATPase軸是否在動(dòng)物模型中介導(dǎo)LCA和CR抗衰老作用。結(jié)果顯示肌肉特異性表達(dá)的去乙?;疺1E1亞基V1E1(3KR)可激活A(yù)MPK,并顯著提升老年小鼠肌肉功能、能量消耗和運(yùn)動(dòng)能力。而敲除AmpkTulp3(4G)基因時(shí),這些功能并未得到改善。這一發(fā)現(xiàn)有力地證明了TULP3-sirtuin-v-ATPase軸在抵御衰老過(guò)程中的關(guān)鍵作用。(圖9)

 

圖9. TULP3-sirtuin-v-ATPase軸在抗衰老中發(fā)揮作用

接下來(lái)研究人員采用線蟲和果蠅作為模型生物展開探究。他們發(fā)現(xiàn)敲除線蟲的tub-1基因(TULP3的同源基因)和果蠅的ktub基因(TULP3的同源基因)會(huì)抑制LCA激活A(yù)MPK的能力,消除LCA的抗衰老功能。當(dāng)在tub-1基因敲除的線蟲和ktub基因敲除的果蠅中重新引入野生型TULP3時(shí),LCA的抗衰老功能得以恢復(fù)。在線蟲和果蠅中表達(dá)哺乳動(dòng)物的V1E1(3KR)亞基,可觀察到AMPK的激活以及個(gè)體壽命延長(zhǎng)。這些發(fā)現(xiàn)表明,TULP3-sirtuin-v-ATPase軸通過(guò)去乙?;痸-ATPase的V1E1亞基,將LCA信號(hào)傳遞至AMPK,從而在線蟲、果蠅和小鼠中模擬了CR抗衰老作用。雖然LCA展示了延長(zhǎng)健康壽命和改善代謝功能的潛力,但根據(jù)目前的研究結(jié)果來(lái)看,其在哺乳動(dòng)物壽命延長(zhǎng)中的效果有限。

 

圖10. LCA模擬CR在TULP3-sirtuin-v-ATPase軸的作用機(jī)制

林圣彩團(tuán)隊(duì)經(jīng)過(guò)多年實(shí)驗(yàn)篩選成功發(fā)現(xiàn)了一種模擬熱量限制效果的物質(zhì)——石膽酸(LCA),并經(jīng)過(guò)大量實(shí)驗(yàn)分析揭示了石膽酸在小鼠、線蟲和果蠅模型中通過(guò)TULP3-sirtuin-v-ATPase-AMPK信號(hào)通路展現(xiàn)出的抗衰老作用。這一重要發(fā)現(xiàn)為長(zhǎng)壽藥物的開發(fā)奠定了新的理論基礎(chǔ)。

但目前石膽酸對(duì)人類健康和壽命的具體影響尚不明確,亟需進(jìn)一步研究來(lái)豐富人們對(duì)石膽酸的了解,研究人員提醒,高濃度石膽酸可能存在毒性,不建議擅自購(gòu)買或服用石膽酸。

 

 

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靶標(biāo)

核心貨號(hào)

靶標(biāo)

核心貨號(hào)

AXIN1

C191

AMPK

A679

AXIN2

C192

ACCA

B284

FXR

C042

LKB1

H115

PXR

D950

Histone H3

A285

VDR

A475

TFAM

H050

CAR

C422

COX1

D283

LXRα

C044

COX2

D284

LXRβ

D135

COX3

D285

S1PR2

E692

SIRT1

E912

CHRM2

B213

SIRT2

A430

CHRM3

B838

SIRT3

E913

H2AX

Q000

SIRT4

E914

S6K

L979

SIRT5

E915

TGR5

D255

SIRT6

E916

UCP1

F557

SIRT7

E917

 

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