武漢云克隆科技股份有限公司

基于流式熒光法的多因子檢測技術(shù)是在不同顏色或大小的編碼微球上包被不同的特異性抗體，以達到單個樣本可同時檢測多個靶標因子，從而實現(xiàn)高通量的蛋白定量技術(shù)。云克隆公司有十多年的蛋白、抗體和ELISA試劑盒的研發(fā)經(jīng)驗，通過采用和ELISA一致的抗體對篩選和試劑優(yōu)化體系，在此基礎(chǔ)之上開發(fā)出了更高標準和更高性能的多因子檢測試劑盒（Multiplex Assay Kit），力求為客戶提供更便利更全面的分析工具。多因子檢測試劑盒自上市以來備受科研工作者的青睞，但由于和ELISA的操作方法大有不同，大家在使用過程中可能會遇到各種操作方面的問題，尤其是樣本磁珠讀數(shù)異常的問題較為常見。本期我們整理出可能原因和處理建議供大家參考：

1. 樣本中的脂質(zhì)、膠體或沉淀物等導(dǎo)致磁珠聚集和沉淀：

1）所有樣本在使用前建議再次4℃離心20-30分鐘，轉(zhuǎn)速10,000×g。離心后取上清進行檢測。冷凍樣本建議解凍后按照上述方法再次離心后取上清檢測。再次離心的原因是為了除去可能存在的任何碎片、脂質(zhì)和細胞等雜質(zhì)。這些雜質(zhì)可能會在樣本和磁珠孵育的過程中造成磁珠聚集和沉淀，從而影響最終的磁珠讀數(shù)。尤其是針對血漿樣本，細胞或組織裂解液或其他有粘性或者明顯含有脂質(zhì)、碎片的樣本類型；

2）對于某些粘性物質(zhì)含量較大或顆粒物含量較多的樣本，可能需要重復(fù)離心2~3次才能獲得完全澄清的上清液，這對多因子檢測至關(guān)重要；

3）樣本和磁珠一起孵育的過程中需保證充分振蕩，避免磁珠因振蕩不足結(jié)塊，導(dǎo)致洗板不充分或者讀數(shù)時無法獲取足夠的磁珠；

4）組織勻漿類樣本和磁珠反應(yīng)時，建議覆膜室溫（18-25℃）避光振蕩反應(yīng)2h或者4℃過夜，效果會優(yōu)于37℃避光振蕩1.5h。4℃震蕩孵育過夜后需先在室溫下振蕩1h之后再進行后續(xù)步驟，以避免孵育時間太久和低溫導(dǎo)致的磁珠凝結(jié)；

5）溶血樣本中的細胞碎片等其它雜質(zhì)太多會導(dǎo)致磁珠凝結(jié)，另外，紅細胞裂解釋放的血紅蛋白等物質(zhì)會影響檢測結(jié)果，溶血樣本不建議進行檢測。

2. 磁珠保存不當造成讀數(shù)異常：

磁珠需4℃避光保存，不可置于-20℃冷凍保存或室溫保存，低溫和長期室溫會影響磁珠的性能，導(dǎo)致結(jié)合效率降低，影響檢測結(jié)果。

3. 磁珠在加入板孔前沒有完全懸浮，導(dǎo)致加入板孔中的磁珠數(shù)不足或磁珠在板孔間的均一性較差影響最終檢測結(jié)果：

預(yù)混合磁珠使用前，請用渦旋混合儀輕柔震蕩防止磁珠沉降。加入板孔中時請保持預(yù)混磁珠處于懸浮狀態(tài)。檢測過程中預(yù)混合磁珠需避光。

4. 洗板過程中由于洗板操作不當造成的磁珠丟失：

1）請使用合適的磁力架，需保證96孔板牢固吸附在磁力架底部，洗板過程中請保持96孔板在磁力架上。建議手動洗板，即用單通道或多通道移液器小心將板孔內(nèi)液體移除，殘留在板孔內(nèi)的少量液體無需吸干，更不要在紙上拍打酶標板；

2）若使用自動洗板機進行洗板，請調(diào)整好吸液針和96孔板之間的高度，以防吸液針觸及板孔底部將磁珠吸出。請在熟練使用自動洗板機之后再進行正式實驗。

5. 讀數(shù)之前沒有充分懸浮板孔中的磁珠，導(dǎo)致進樣針堵塞或吸取的磁珠不足：

每次使用前請充分清潔進樣針，調(diào)整好進樣針和板孔之間的高度。同時，在讀數(shù)前請充分振蕩96孔板，使板孔中的磁珠懸浮，可借助渦旋振蕩儀振蕩或者移液器反復(fù)吹打使磁珠充分懸浮，必要時也可進行超聲處理使磁珠分散。

6. 儀器使用或設(shè)置不當造成磁珠讀數(shù)異常：

儀器在使用之前需進行校準和驗證。針對不同的儀器需要調(diào)整進樣針的高度，如有必要可向廠家咨詢儀器設(shè)置參數(shù)。

云克隆多因子試劑盒操作視頻詳見:

多因子檢測試劑盒（Multiplex Assay Kit）磁珠讀數(shù)異常原因及解決方案

多因子試劑盒常見問題原因及解決方案總結(jié)：

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