云克隆抗體anti-mouse IRF4在Blood發(fā)表！

文章題目： 腫瘤特異性T細胞不能根除淋巴瘤的起始B細胞！

要點: 1. 在新構建的小鼠模型中，腫瘤特異性T細胞缺失會增加B細胞淋巴瘤的發(fā)生率；

2. 淋巴瘤的起始B細胞不能被免疫系統(tǒng)清除，使得依然有進展成淋巴瘤的風險。

那么，讓我們一起來看一下作者是怎么進行論證的！

第一步，建立B細胞淋巴瘤。

將未成年的攜帶TAg的LoxP-Tag小鼠分別和CD19-Cre或CD19-CreER^T2小鼠雜交，通過Cre/loxP介導的重組酶，TAg在B細胞系中特異性表達的開關被開啟。在CD19-Cre x LoxP-Tag小鼠中，Cre重組酶的活性是持續(xù)性表達的，而CD19-CreER^T2 x LoxP-Tag小鼠中的Cre重組酶的活性依賴于外源性的他莫昔芬。借助RFP熒光小鼠，分析了兩種Cre重組酶的重組率，結果顯示CD19-Cre較高。但以上驗證僅是一種推斷，因為TAg和RFP轉基因插入的是不同的基因位點。為了評估CD19-Cre x LoxP-Tag和CD19-CreER^T2 x LoxP-Tag小鼠產(chǎn)生的TAg對特異性CD8⁺ T細胞應答的能力，進行了四聚體技術分析和細胞胞毒實驗，結果表明CD19-Cre x LoxP-Tag小鼠的CD8⁺ T細胞TAg耐受，如圖所示：

第二步，驗證CD19-Cre x LoxP-Tag而不是CD19-CreER^T2 x LoxP-Tag小鼠易發(fā)展成B細胞淋巴瘤。

根據(jù)第一步的結果我們很容易推斷，CD19-Cre x LoxP-Tag小鼠易發(fā)展成B細胞淋巴瘤，而不是CD19-CreER^T2 x LoxP-Tag小鼠。那么，作者從哪些方面進行了驗證呢？

通過比較CD19-Cre x LoxP-Tag和他莫昔芬誘導的CD19-CreER^T2 x LoxP-Tag小鼠在B細胞淋巴瘤生存率和脾、淋巴結組織化學染色以及流式細胞分析脾細胞B細胞譜系標志物和TAg表達情況。

結果顯示CD19-Cre x LoxP-Tag而不是CD19-CreER^T2 x LoxP-Tag小鼠易發(fā)展成B細胞淋巴瘤并且生存率更低。其B細胞淋巴瘤生存率統(tǒng)計結果如圖：

B細胞淋巴瘤生發(fā)中心標志物檢測陰性——該B細胞淋巴瘤為生發(fā)中心外B細胞起源

第三步，驗證體外注射TAg⁺ B細胞是否具有致瘤性和免疫原性。

分別將攜帶淋巴瘤的CD19-Cre x LoxP-Tag小鼠和無腫瘤LoxP-Tag對照同窩小鼠的1 x 10⁶個脾細胞靜脈內(nèi)注射到Rag^{- / -} 小鼠體內(nèi)。從生存曲線和脾臟大小進行評估的結果如下圖：

以上結果說明，體外注射 TAg⁺ B細胞具有致瘤性和免疫原性。

第四步，驗證在TAg特異性T細胞缺失的情況下，淋巴瘤的發(fā)病率增加。

分別將CD19-CreER^T2 x LoxP-Tag和CD19-Cre x LoxP-Tag小鼠的B細胞或脾細胞靜脈注射到Rag^{- / -} 小鼠。比較CD19⁺ TAg⁺淋巴細胞百分比、生存率、B細胞淋巴瘤TAg⁺百分比，可得到結論：在TAg特異性T細胞缺失的情況下，淋巴瘤的發(fā)病率增加。

接下來分析內(nèi)源性TAg特異性CD8⁺ T細胞的應答反應。

為了排除內(nèi)源性TAg特異性CD8⁺ T細胞對實驗的影響，比較LoxP-Tag和CD19-CreER^T2 x LoxP-Tag小鼠的T細胞應答情況并無顯著性差異，進一步通過細胞胞毒實驗證實TAg特異性的CTL應答。

最后確定，TAg特異性T細胞不能根除淋巴瘤起始B細胞。

在淋巴瘤發(fā)展過程中，可以發(fā)現(xiàn)經(jīng)過他莫昔芬誘導的CD19-CreER^T2 x LoxP-Tag所有的小鼠的血細胞中均能檢測到TAg mRNA。

在致癌基因誘導前一周，用TAg⁺的癌細胞免疫小鼠，結果表明盡管誘導了免疫應答，但仍未能清除TAg起始B細胞，如下圖所示：

該結論也進一步在脾、骨髓和腹膜腔中得到了證實。

迄今為止，對B細胞淋巴瘤與T細胞之間的相互作用知之甚少。研究者通過建立轉基因小鼠模型，誘導B細胞特異性的癌基因——SV40 T抗原（TAg）表達，研究腫瘤特異性T細胞在自發(fā)性B細胞淋巴瘤發(fā)展中的作用。

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