競爭抑制ELISA試劑盒標曲擬合及樣本測算方法
競爭抑制 ELISA ，其主要原理是將標本中的靶分子和一定量的靶分子標記物競爭與酶標板上固相抗體結合。 標本中靶分子量愈多，結合在酶標板上的靶分子標記物愈少，最后的顯色也愈淺，也就是說，顯色的深淺與樣本中靶分子含量成負相關。小分子類激素、小分子藥物等 ELISA 測定多用此法。這是因為小分子半抗原或多肽半抗原，缺乏兩個以上的抗體結合位點，無法形成雙抗體夾心結果，對用競爭抑制法定量檢測。
如何分析檢測數(shù)據(jù)測算結果呢？在這里為大家推薦一種方法，用EXCEL 軟件即可完成結果測算。
1、標準曲線擬合方法
以云克隆公司的去甲腎上腺素(NE)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)（CEA907Ge）為例，進行詳細講解。與雙夾心法 ELISA 不同的是，競爭抑制 ELISA 的標準品吸光度值并不需要減去陰性對照孔的本底吸光度值。以標準品的各孔吸光度值為 x 軸，標準品各濃度取 Log10 后的值為 y 軸作 XY 散點圖，得到一條 5 點曲線，其中 X 軸為吸光度（Optical Density），Y 軸為濃度的對數(shù)值（Log. of Concentration）。
圖1為CEA907Ge的一次實驗結果，包括標準品和部分樣本測值。
圖1 標準品和部分樣本測值
CEA907Ge試劑盒的檢測范圍是61.7-5000ng/ml。將標準品各個濃度孔依圖2羅列在第1列，第2列和第3列為各濃度標準品測得的O.D.值，第4列為O.D.值平均值，第5類為濃度的對數(shù)值（標準品各濃度取對數(shù)值）。詳見圖2。
圖2 標準曲線
選定圖2黃色區(qū)域，點擊菜單欄“插入”后點擊“插入散點圖”（見圖2），得到 5 點組成的散點圖（圖3）。
圖3 散點圖
在散點圖（圖3）的5點中任選一點以右鍵打開，選擇”添加趨勢線(R)”，圖表上右會彈出一個對話框。在“趨勢線選項”點擊“趨勢線”，選擇“多項式”，并將“順序”設定為 2 。最后，勾選“顯示公式(E)”和“顯示 R 平方值(R)”（如圖 4 所示），便會出現(xiàn)標準曲線的對應公式及 R^2 值（如圖 6 所示）。
圖 4 標準曲線示例圖
2、樣本濃度測算
如圖5，將樣本O.D.值取平均值（綠色列）作為X帶入公式中，得到Y值,作以10為底的指數(shù)運算，若樣本原液檢測，測算的Y值為樣本濃度，若樣本稀釋后檢測，測算的Y值乘以稀釋倍數(shù)，為樣本的濃度（紫色列）。
圖 5 樣本濃度測算