慢病毒和腺病毒表達系統(tǒng)
借助于病毒顆粒作為基因的載體，利用病毒的侵染特性，自發(fā)的侵染哺乳動物細胞，將目的基因?qū)氩溉閯游锛毎?，以完成目的產(chǎn)物的超量表達或干涉。該技術(shù)目前在基因、小RNA、轉(zhuǎn)錄因子等功能驗證領(lǐng)域以及重組蛋白表達、轉(zhuǎn)基因哺乳動物制備等領(lǐng)域作為一種主要的技術(shù)手段被廣泛使用。該技術(shù)體系主要由病毒包裝和病毒侵染篩選兩個部分組成（如圖所示）。病毒包裝就是借助基因工程的方法將目的基因片段與人為改造病毒的基因組通過特殊的位點連接起來形成重組病毒基因組以及重組病毒制備的過程，常規(guī)使用的病毒包裝系統(tǒng)有慢病毒包裝系統(tǒng)和腺病毒包裝系統(tǒng)。包裝好的慢病毒和腺病毒都可以自主的侵染哺乳動物細胞，導(dǎo)入外源基因。
慢病毒包裝系統(tǒng)采用的是人工改造過后的HIV病毒系統(tǒng)，包括1個表達質(zhì)粒和多個輔助質(zhì)粒，通常采用293T細胞作為宿主繁育病毒，包裝好的重組病毒侵染細胞，會將目的基因隨機、穩(wěn)定的插入宿主細胞基因組，實現(xiàn)目的基因穩(wěn)定、長期的表達目的產(chǎn)物。腺病毒表達系統(tǒng)采用的是人工改造過后的Ad5病毒系統(tǒng)，通常包括1個表達質(zhì)粒和1到多個輔助質(zhì)粒，通常采用293細胞作為宿主繁育病毒，包裝好的重組病毒侵染細胞，目的基因游離于宿主細胞基因組獨立表達，可實現(xiàn)目的產(chǎn)物快速、高豐度的表達，同時避免因為基因整合而產(chǎn)生的基因突變現(xiàn)象。盡管慢病毒表達系統(tǒng)和腺病毒表達系統(tǒng)在實驗中被廣泛應(yīng)用，但是這兩種不同的表達系統(tǒng)在動物和細胞實驗中具有不同的使用范圍，產(chǎn)生的效果也存在很大的差異（如表1所示）。
表1：慢病毒表達系統(tǒng)和腺病毒表達系統(tǒng)的特點和區(qū)別
| 名稱 | 慢病毒表達系統(tǒng) | 腺病毒表達系統(tǒng) |
| 病毒基因組 | RNA | DNA |
| 原始病毒 | 人類免疫缺陷I型病毒（HIV） | 人5型腺病毒（AD5） |
| 載體系統(tǒng) | 1個表達載體以及多個輔助載體 | 1個表達載體以及1到多個輔助載體 |
| 包裝細胞 | 293T細胞 | 293細胞 |
| 病毒包裝方式 | 表達載體和輔助載體共轉(zhuǎn)包裝細胞獲得重組病毒顆粒。該過程不裂解細胞，病毒會在細胞培養(yǎng)液上清中大量聚集。 | 表達載體和輔助載體共轉(zhuǎn)包裝細胞獲得重組病毒顆粒。裂解細胞獲得重組病毒顆粒。 |
| 是否整合到宿主基因組 | 是 | 否 |
| 表達豐度 | 高豐度表達 | 高豐度表達 |
| 表達時間 | 慢（2-4天） | 快（1-2天） |
| 病毒滴度????????? | 1*108~1*1010TU/ml | 1*1011~1*1013TU/ml |
| 克隆容量 | ≤6kd | ≤8kd |
| 免疫原性 | 弱 | 強 |
| 侵染效率 | 低 | 高 |
| 過表達目的蛋白 | 適合 | 適合 |
| 過表達microRNA | 適合 | 不適合 |
| RNAi | 適合 | 適合 |
| 穩(wěn)定轉(zhuǎn)化細胞或動物 | 適合 | 不適合 |
| 活體動物實驗 | 不太適合 | 適合 |
| 細胞侵染實驗 | 分裂或非分裂的哺乳動物細胞，對神經(jīng)細胞等感染效果差。 | 分裂或非分裂的哺乳動物細胞，對細胞類型無選擇性。 |
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