His-tag標簽單克隆抗體-重組蛋白檢測的好幫手
通過重組技術獲取目的蛋白是目前應用最廣泛的生物技術之一,目的蛋白的純化是重組 技術中最關鍵也是最難的一步,純化的好壞決定了目的蛋白的優(yōu)劣。目前常規(guī)方法是使用目 的蛋白和一個親和純化標簽(Tag)融合表達,通過親和純化標簽蛋白來純化目的蛋白。
同時,如何檢測目的蛋白的表達也是生物工作者面臨的一大問題,針對不同的目的蛋白 運用不同的目的蛋白特異性抗體顯然太復雜且成本太高,有時甚至在市場上根本找不到和實 驗者相匹配的特異性抗體。如果我們選擇針對標簽蛋白的特異性抗體則不僅解決了檢測這個 難題,而且這個抗標簽的單抗就相當于我們平時所使用的“二抗”,也就是說,對于任何使 用了同一個標簽蛋白的目的蛋白都可以檢測了,因此,抗標簽蛋白的抗體對于基因工程工作 者是一個非常實用的目的蛋白檢測工具。
常用的 Tag 包括 Myc、HA、Flag、His、Gst 等,其中 His 是最常使用的。而 His-Tag(HHHHHH),這個只有 6 個組氨酸的標簽在 pH8.0 時不帶電,很小,幾乎沒有什么 免疫原性,因此,它的抗體,包括多抗和單抗,制備是非常難的,以至于在市面上很難找到 好的抗 His 標簽的抗體,就算有,也是國外進口且很貴。
優(yōu)爾生公司嘗試過很多傳統方法制備 His 單抗均未成功,終于在使用自主研發(fā)的特殊方 法后,成功制備出抗 His-tag 小鼠單克隆抗體(Monoclonal Antibody to Hexa Histidine-Tag (H6), MAX656Ge21)。經檢測,其特異性好,性質穩(wěn)定,完全可以運用于所有帶 His-Tag 的不同目 的蛋白的檢測。
His-tag 抗體可用于檢測與 His-tag 融合表達蛋白的表達、細胞內定位,以及純化、定性 或定量檢測 His-tag 融合表達蛋白等。本抗體可以檢測位于融合蛋白 N-terminal 的 His-tag, 也可以檢測位于融合蛋白 C-terminal 的 His-tag。目前,優(yōu)爾生公司自主研制的其他標簽蛋白 的抗體還有 GST 標簽蛋白抗體等。